2012年 8月 热 带 农 业 科 学 第 32卷第 8期 Aug．2012 Vo1．32，No．8 气相色谱法测定水果中咪鲜胺残留量的方法研究① 郑雪虹 ，z ② 吕岱竹 ， 谢德芳 ， 冯信平 ， 林靖凌 ，2 1中国热带农业科学院分析测试 中心 海南海口 ； 2农业部热作产品质量安全风险评估 实验室 海南海 口 座机电话号码 摘 要 采用丙酮震荡提取样 品．在水解衍生的步骤 中创造性地使用试管加入吡啶盐酸盐，于 220~C的烘箱里 水解 1．5h．经过处理后使用气相色谱 ECD进行测定 。结果表 明：该方法 的线性范围为 0．005~0．500ng，相关 系数为 0．9999；对香蕉 、绿橙 、花牛苹果 、青苹果、猕猴桃、砀 山梨 6种空 白基质分别进行 了0．O1、0．10、1．O0 mg／kg3个水平加标 ．其 回收率为 81．0％～106．4％，相对标准偏差 RSD，n 5 为 0．3％～5．7％；该方法的最低检 出限为 0．O1mg／kg，并且烘箱水解 的新方法操作简便 ，提高了检测效率 。

说 明该方法具有快速 、便捷 、安全 、 清洁、成本低 的特点，可满足大批量水果样 品中咪鲜胺残 留量的分析要求。 关键词 气相色谱 ；水果 ；咪鲜胺 ；农药残 留 ；烘箱 分类号 0657．71 A M ethod ZHENG ， LV ’- XlE ’l2 FENG ’-2 LIN ’'2 ，nces， ， ； ， ， The from ．The wasin ． 220~C for1．5h．． 0．01～ 10．00ng 2 -0．9999 ．0．O1，0．1，1mg／，green ， apple，green apple， and and the ．0％～106．4％． RSD，n 5 ％～5．7％． was0．01mg／kg．，，quick，，safe，clean，low— could ． ；rfuit；；；oven 咪鲜胺 是德 国先灵农业化学有 限 用 的采后处理药剂 ，防治贮藏期病害 3[-5J。

咪鲜胺 公司 现拜耳作物科学公司 于 1977年开发 的一种 咪唑 在环境中首先降解为和．最 类广谱高效杀菌剂n]．其化学名称为1_N一丙基一N 终都降解为．即2，4，6一三氯苯酚 。尽管 [2一 2，4，6一三氯氧基 乙基 卜咪唑一卜甲酰胺 。咪鲜 咪鲜胺属低毒杀菌剂 ，但其最终产物 2，4，6一三氯 胺属于内吸性杀菌剂 ．主要通过抑制甾醇的生物合 苯酚是环境 中重要污染物之一．会对人类的健康造 成而起作用 ．它对于子囊菌和半知菌引起的多种病 成潜在威胁 ，并污染生态环境，因此 ，其在水果生 害防效极佳 2[] 目前咪鲜胺是水果行业 国际广泛使 产和储藏 中的残留问题受到越来越多的关注 ① 收稿 日期：2012—05—04；责任编辑 ／黄东杰 ；编辑部 E-mai1：rdnk@163．com。 ② 郑雪虹 1969~ ，女，高级农艺师，主要从事农产品及环境中有毒有害物质的检测和研究。 一 43— 2012年8月 热带农业科 学 第 32卷第8期 国内外对咪鲜胺残留的检测主要存在以下几个 箱购 自上海福玛实验有限公司 方面的问题 ：一是采用气相色谱一质谱联用 Gc—MS [6-7]． 1．2 方 法 高效液相色谱一质谱联用 HPLC—MS [8-9]．虽然前处理 1．2．1 前处理方法 简单 ．但仪器昂贵难 以普及应用：二是使用高效液 1 称取样品20．00g，置于 250mL锥形瓶内． 相色谱 HPLC DO~12]．但 只可检测咪鲜胺 的残 留量 ． 加入丙酮 40．0mL，振荡提取 20min，振荡频率 而未能检测其全部代谢物 ．特别是 2，4，6一三氯苯 250r／min．提取液经装有滤纸的漏斗过滤 ．滤渣 酚的残留量，且灵敏度相对气相色谱法低 三是样 再用 40．0mL丙酮分次淋洗 ．合并滤液于 250mL分 品前处理技术落后ns ．在处理大量样品时消耗大 液漏斗 中．用石油醚萃取 2次 每次40．0mL ．收集 量时间和试剂 ，其效率较低 本研究采用气相色谱法 上层石油醚相 ．合并之．经装有无水硫酸钠 的漏斗 对水果中的咪鲜胺残留检测方法进行研究．对样品前 干燥 ．并用石油醚约20．0mL洗涤 ．收集于 250mL 处理方法进行优化 ．弃去冷凝装置 ．并采用新方 磨 口圆底烧瓶中．用旋转蒸发仪浓缩至干 。

式——烘箱水解衍生法，从而建立一套快速、便捷 、 2 在上述磨 口圆底烧瓶加入 2O．00mL石油醚 安全 、清洁、成本低且灵敏度高的检测方法 。 定容 ，吸取 2．o0mL放入 20mL具塞试管 ．氮气吹 干 ．加人 2．0g吡啶盐酸盐 ．塞上试管塞 ，在试管 1 材料与方法 与试管塞之间夹一条滤纸 宽约4～6m．长约5cm ． 1．1 材料 置于 220℃的烘箱里水解 1．5h，自然冷却到室温。 1．1．1 植物材料 3 在具塞试管加入 15．0mL蒸馏水溶解吡啶 香蕉样品采 自中国热带农业科学院分析测试 中 盐酸盐 ．用 30．0mIJ水分数次将试管里 的样品转移 心海 口香蕉试验基地 ；绿橙 、花 牛苹果 、青苹果 、 至 250mE分液漏斗 中．用石油醚萃取 2次 每次 猕猴桃 、砀山梨均在市场上购买。 30．0mL ，收集上层石油醚相 ，合并之 ，经装有无水 1．1．2 试 剂 硫酸钠的漏斗干燥 ．用石油醚 20．0mL洗涤漏斗 ． 丙酮、正 己烷 、石油醚 30~60~C 均为分析纯 购 收集滤液于 250mE磨 口圆底烧瓶 中．用旋转蒸发 自广州化学试剂厂 ：无水硫酸钠 分析纯 使用前在 仪浓缩至干。

550℃下烘烤 2h．冷却后再使用：浓硫酸 优级纯 购 4 在上述磨 口圆底烧瓶加入 20．O0mL石油醚 自广州化学试剂厂 ：吡啶盐酸盐 纯度98．5％，干燥保 定容 ．吸取 1O．00mL放入 l5mL具塞试管中，加入 存 购 自西亚试剂有限公司：实验用水均为二级水。 2．0mL浓硫酸 ，涡旋 1min，静置 20min，取上清 咪鲜胺标准 品：纯度 97．6％，购 自国家农药质 液进行 GC—ECD分析测定 量监督检测中心。咪鲜胺标准溶液的配制 ：称取咪 1．2．2 气相色谱条件 鲜胺标准品0．025g，用正己烷溶解定容至25．0mL， 毛细管色谱柱 ：DB一17 30mXO． ；柱箱 终浓度为 1．0×10。~g／mL标准储备液。 温度 ：起始温度 80℃，保留 1min，以15℃／min的 2，4，6一三氯苯酚标准品：纯度99．5％，购 自Dr． 速度升至 190℃．保 留4min．又 以30℃／min的速 —。2，4，6一三氯苯酚标 度升至 240~C，保 留 1min，共计 15min；ECD温 准溶液：称取2，4，6一三氯苯酚标准品0．010g，用正 度 ：300~C，尾 吹 30．00mL／min；进样 口温度 ： 己烷溶解定容至 10．0mL．终浓度为 1．0×10。

~g／mL 240~C；进样量 ：1．O0 ；载气 ：氮气 ，纯度 ≥ 标准储备液 根据需要再用正己烷逐级稀释配制成 99．999％．流速为 l0．O0mL／min：进样方式 ：无分 浓度为 0．005、0．01、0．05、0．10、0．50~g／mL的 流进样 ．0．80min后打开分流阀和隔垫吹扫阀。此 系列标准工作溶液 条件下 ．以峰面积作为定量指标 ，2，4，6一三氯苯酚 1．1．3 仪器和设备 保 留时间为 6．78min，标准 曲线见 图 1，浓度为 气相色谱仪 ： 带ECD检测器 购 0．005、0．O1、0．05、0．10、0．50Dg／mL。 自美 国公司 ：D6X一一1电子控温烘 1．2．3 咪鲜胺残留量的计算公式 一 44 一 郑雪虹 等 气相色谱法测定水果 中咪鲜胺残 留量的方法研究 品．设定 20min．几十个样 品同时提 1 _ 取 ．比用均质方法一个个地匀浆总的时 r 间要短 此外．震荡的回收率为 85．2％ ～ _ _ _ 98．2％．而均质的回收率为 74．6％～ n I ● 85．3％．所以采用震荡方法 f 为保证萃取效率．对石油醚萃取体 ． n 积和次数进行了考察 选择这 6种水果 ， 套| 的空 白基质进行 0．10mg／kg加标水平 图 1 2，4，6-三氯苯酚标准品色谱 图 的回收率实验 。

按 1．2．1 1 方法 ．分 别使用 40．0、50．0mL石油醚萃取 ，每 ： ： 鱼 个浓度萃取 2次 ．每个试样重复 3次 ．然后按照 一 m × l×1000 1．2．1 2 、 3 、 4 的步骤进行操作和上机测定 。 其 中： ：样 品中的咪鲜胺残 留量 mg／kg ； 结果表明：使用石油醚40．0mL萃取 2次，可将此 C 样 品上机溶液 2，4，6一三氯苯 酚 的浓度 农药及代谢产物提取完全 ．回收率为 80．1％～ 1~g／mL ； 94．4％。 。： 样品定容体积 ： 2．1．2 样品水解衍 生采用烘箱加热的方式优化 2： 提取溶剂的体积 mL ； 已有许多关于浓缩后的样品加毗啶盐酸盐水解 1： 分取体积 mL ； 衍生方面的报道 ．通常是 1个样品配备一套冷凝装 m：样品质量 g 果样以鲜重计 。 置 ，加热方式有沙浴加热、电热套加热 、油浴加热 等[。，z 用配套 的冷凝装置冷凝 ．其水解过程剧 2 结果与分析 烈沸腾 ，必须用沸石防爆 ：其缺点是一套冷凝装置 2．1 样 品前处理条件 的优化 只能处理 1个样品．如处理多个样品。则需配几套 2．1．1 提取条件的选择 冷凝装置 ．不适应大批量样品的处理 。

沙浴和电热 本研究特别选择 了香蕉 、绿橙 、花牛苹果 、青 套的温度不易控制在 210~240~CLl．导致水解效 苹果、猕猴桃 、砀山梨共 6种有代表性的水果进行 果不稳定 油浴过程中气味难闻且弥漫在整个实验 研究。其 中叶绿素含量高的有香蕉 、绿橙 、猕猴桃 ， 室 油浴完后玻璃器皿沾上油污难以洗涤干净。但 水分含量 高的有砀 山梨 、绿橙 ，酸度大的有青苹 目前 尚未有人试过用烘箱作为加热方式 果、猕猴桃，甜度大 的有花牛苹果、砀山梨、绿橙 。 本研究采用电子控温烘箱作为加热方式 ．控温 已有文献报道 ．多采用丙酮提取 ，或震荡或均 上下不超过 l℃．采用 1．2．1 2 的步骤进行水解衍 质 ．然后用二氯 甲烷萃取 [13，]。本研究通过试验 生 ．经多次试验 ．此水解方式十分安全可靠。在试 发现 ．丙酮虽能充分提取咪鲜胺及其代谢产物 。但 管与试管塞之间夹一小条滤纸 ．这个试管就留有一 同时提取 出植物组织中较多色素及其它杂质成分 ： 丝缝 ．不是一个完全密闭的容器 ，纸条很薄，水解 用二氯甲烷萃取时．它与丙酮相溶．则把这些色素 衍生反应加的吡啶盐酸盐是过量的．试管里的空气 杂质等也较多萃取出．为下一步净化带来困难 。

以 和有机试剂受热出去一点 ．不会影响结果 ，而且水 石油醚为萃取剂时[2]，它与丙酮只部分互溶 ，在萃 解全程无沸腾现象 ．不会将瓶塞顶开 ．也不会造成 取 目标物 的同时 ．色素和糖分等杂质成分提取较 容器破裂引起事故 ．致使有机试剂泄露 ．因此不需 少 ．极性较适合于咪鲜胺的提取。因此 ，本研究选 用沸石 1个样品对应用 1个试管．20~30个试管 石油醚作为萃取溶剂 可以插入同 1个试管架 ．同时放入烘箱进行水解 ． 通过对 比震荡和均质 2种提取方式 ．其 中对于 不但水解效果稳定 ．而且可以处理大量样品。从而 样品量大时可选用震荡方法 ．它可同时处理多个样 大幅度提高加热水解衍生样品的效率 ．且易清洗。 一 45 — 2012年8月 热带农业科学 第 32卷第8期 为保证以烘箱为加热方式的水解效果．对烘箱温度 9．53mg／kg的范围内有 良好的线性关系。 和水解时间进行考察 。设定 3个烘箱温度 210、 通过对香蕉、绿橙、花牛苹果、青苹果 、猕猴 220、240℃，3个水解 时 间 1、1．5、2h，按照 桃、砀山梨的空白样品进行加标回收率实验，信噪比 1．2．1的步骤进行操作 。

结果表 明 ：烘箱温度 为 10时．此时样品溶液中的2，4，6一三氯苯酚浓度为 220℃．水解 1．5h为最佳条件 ．将 咪鲜胺及 中间 最低检出浓度 0．005~g／mL．当样品质量为20g，样 代谢产物转化成 2，4，6一三氯苯酚最为完全 ．回收 品的提取溶剂的体积为 20mL。分取体积为 2mL， 率为90．0％～107．6％ 最后样品的定容体积为 20mL．按照残 留计算公式 2．2 气相 色谱条件 的优化 确定这 6种水果咪鲜胺 的检出限均为 0．O1mg／kg。 咪鲜胺 的代谢产物 2，4，6一三氯苯酚分子量为 仪器灵敏度为 1．0X10 g 见 图3和图4 。 197．44．极性中等。本研究采用极性 中等的DB一17 的30m的气相色谱柱进行分析 ．采用几种不同的升 温方式 ： 1 柱箱温度：起始温度80℃，保留lmin， 以20℃／min的速度升至 245℃．保 留6min，共计 15．25min： 2 ：柱箱温度 ：起始温度 120℃，保留 1min．以 10℃／min的速度升至 200℃．保留4min， 又 以30℃／min的速度升至 260℃ ．保留 lmin，共 计 16min： 3 ：柱箱温度 ：起始温度 80℃，保留 图3 水果基质空白样 品谱 图 1min，以 15℃／min的速度升至 190℃，保留4min， 又以30℃／min的速度升至 240℃ ．保 留 1min．共 计 15min 结果发现第 3种升温方式可将 2，4，6一 三氯苯酚出峰时间提前到 6．78min．节省了分析 时间．且 2，4，6一三氯苯酚和样品中杂质完全分离． 可满足分析的要求 2．3 方法 的线性 范 围和检 出限 将 1．2．2中已经配制好 的2，4，6一j氯苯酚标 图 4 ’水果基质加标 回收样 品谱 图 准工作溶液按上述仪器条件进样 ．以标准溶液的质 量浓度 ~g／mL 为纵坐标 ，峰面积为横坐标 ，绘制 2．4 方法的回收率和精 密度 2，4，6一三氯苯酚标准曲线 见 图2 。

线性方程 y一 以空白对照样 品的加标 回收实验来考察方法的 5． +0．．相关系数 r2 0．999 回收率和精密度 ，在不含咪鲜胺的香蕉、绿橙 、花 997．这说 明在 0．005～O．50~g／mL范围内有 良好 牛苹果、青苹果、猕猴桃 、砀 山梨这 6种水果 中分 的线性关系 对应于咪鲜胺在本方法 中O．01～ 别添加 0．O1、0．10、1．O0mg／kg三个水平 的咪鲜 胺 按照本方法进行 5次加标 回收率试验 ．结果详 见表 1。 由表 1可知 ．6个样品分别在咪鲜胺 3个添加水 I；o 平下的回收率为81．0％~106．4％．相对标准偏差 RsD ＼ 为 0．3％～5．7％．说明该方法可满足试验的要求 爱 血l 2．5 实际应用 以市售 的这 6种水果各采 2份为样 品，按照 面积 ／万m2 1．2．1进行样 品前处理 ．并参照 1．2．2的色谱条 图2 2．4。6一三氯苯酚标准工作 曲线 件 ．．测得结果并计算 2，4，6一三氯苯酚含量乘以1．906可 ～ 46 一 郑雪虹 等 气相色谱法测定水果 中咪鲜胺残 留量的方法研究 表 1 咪鲜胺在 6种南北水果中的添加 回收率及标准偏差 换算成咪鲜胺的含量 ．检测结果见表 2。

除猕猴桃 l 试管架 ．同时放人烘箱进行水解 ．不但水解效果稳 份样品未检 出咪鲜胺外，其它样品均有检出，全果 定 ．而且可处理大量样品。从而大幅度提高 了加热 咪鲜胺残留量的范围为 0．420~3．856mg／kg。 水解样 品的效率 ；水解过程不沸腾 、安全、易清 洗 ·该方法简化优化 了样 品前处理，建立了一套快 表 2 市售水果中咪鲜胺 的残 留量 速 、便捷 、安全 、成本低 的检测方法 。同时前处理 方法简单 、回收率高、重现性好 ，可用于咪鲜胺农 药残留量的大批量检测分析 参考文献 [1]陈道茂．杀 菌剂扑霉 灵 咪鲜胺 [J]．农药 译丛 ， 1995．17 3 ：63—65． [2]陈 平 ，陈智东 ，尤玉珍 ，等．施保克在贮藏柑橘上 的 降解与残 留研究 [J]．湖北农业科学 ，2003，48 5 ： 52—54． [3]谢 玲，黄思 良，付 岗，等．25％咪鲜胺水乳剂对香 蕉 冠 腐 病 的控 制 效 果 [J]．农 药 ．2007．33 5 ： 150-155． [4]陈宜修．咪鲜胺 、使百功防治柑桔贮藏期病害试验 [J]． 3 结论 福建果树 ，2000，28 113 ：38—40． [5]唐咸盛 ．施保克加多效唑用于甜橙贮藏保鲜效果好 本研究采用气相色谱一电子捕获检测器 Gc—ECD [J]．中国南方果树，1999，28 5 ：24． 对咪鲜胺残留检测技术方法进行研究 ．对样品前处 [6]张世瑞 ．孙 丹 ．袁宏球 ．气质联用测定番石榴 中咪鲜 理 中创造性地用试管和烘箱进行水解衍生 ，1个样 胺 消解 动 态 和 残 留量 [J]．农 药 ，2010，49 6 ： 品对应用 1个试管 ．20~30个试 管可插入 同 1个 429-431． 一 47— 2012年8月 热带农业科学 第 32卷第8期 [7]张世瑞 ．袁宏球 ．尹桂豪 ．两种热带水果 中咪鲜胺残 [14]尹桂豪 ，韩红新，袁宏球．气相色谱法测定芒果中咪 留 的气 质联 用测 定 [J]．现 代 农药 ，2010，9 4 ： 鲜胺残 留 [J]．华南热 带农业大学学报 ，2007，13 32—34． 3 ：15—17． [8]，，．— [15]．．— ——it—_ tion of its rus with ／time—of— in ， fruit and wheat sam— mass and ion trap mass spec— phy[J]．— [J]．phyA，2005， ，1997，765 1 ：127． 1082 1 ：7卜8O． [16]GotoH． [9]柳训才，陈 平，沈 菁 ，等．液相色谱 一质谱法测定 ％E．C．formu— 蘑菇 中咪鲜胺残 留[J]．分析科学学报 ，2007，23 5 ： [M]．Japan：， 523—526． 1980． [1O]， [17]． post— in in [J]．Meded Fac [J]．， Gent，1980，45 2 ：841—848． 1985，22 卜2 ：99—108． [18]韩丽君，钱传范 ，江才鑫，等．咪鲜胺及其代谢物在 [11]汪传刚，龚道新，邹雅竹 ，等．HPLC法测咪鲜胺及其 水稻中的残留检测方法及残 留动态 [J]．农药学学报 ， 主要代谢物在稻 田水土 中的残 留 [J]．农业环境科学 2005．7 1 ：54—58． 学报 ，2006，25 4 ：l024—1028． [19]罗逢健，楼正云，汤富彬，等．眯鲜胺及其代谢物在 [12]柳训才 ．李胜清。

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